Razvoj pouzdanih i standardiziranih metoda za testiranje osjetljivosti rojeva komaraca na insekticide ključan je za razumijevanje učinkovitosti novih aktivnih sastojaka ili formulacija. Metode za testiranje osjetljivosti rojeva komaraca na kontaktne insekticide ili proizvode (kao što su oni koji se promoviraju u programima javnog zdravstva) dobro su uspostavljene i standardizirane. Međutim, metode testiranja hlapljivih ili aerosolnih insekticida koji se koriste u kućanskim proizvodima teško je učinkovito primijeniti. Na temelju preporuka Svjetske zdravstvene organizacije za kućne insekticide, razvili smo standardiziranu i visokoučinkovitu metodu za testiranje aerosolnih proizvoda korištenjem komaraca u kavezima i učinkovitu metodu dezinfekcije provedenu u Peet-Grady testnoj komori (PG testna komora). Potvrdili smo učinkovitost ove nove metode koristeći populacije komaraca Aedes i Anopheles otpornih na insekticide i osjetljivih komaraca. Nova karakteristika ove metode je uključivanje komore usmjerene na kaveze komaraca, što omogućuje kvantitativnu procjenu stope ubijanja komaraca u stvarnom vremenu nakon izlaganja insekticidu. Dezinfekcija brisom učinkovito uklanja preostalo aerosolno ulje koje sadrži piretroid s površine testne komore, sa stopom smrtnosti manjom od 2% za osjetljive komarce testirane direktno na površini komore. Nije uočena prostorna heterogenost u stopama ubijanja ili smrtnosti među komarcima u kavezima u PG komori. Naša metoda s dvostrukim kavezom pruža osam puta veći protok od metode slobodnog leta, omogućavajući istovremeno testiranje različitih sojeva komaraca i efikasno razlikovanje između osjetljivih i otpornih populacija komaraca koje se testiraju paralelno.
Do danas su se aerosolni insekticidi prvenstveno koristili u kućanstvu za ličnu zaštitu, s ograničenom upotrebom u programima javnog zdravstva. Međutim, nedavne studije su pokazale široko rasprostranjenu upotrebu kućnih insekticida u područjima gdje su bolesti koje prenose vektori rasprostranjene. Bez obzira da li je motivacija repelent protiv komaraca ili prevencija bolesti, postoji hitna potreba za standardiziranim i jednostavnim metodama za probir endemskih populacija komaraca na osjetljivost na kućne insekticide. Ovo je ključno za predviđanje efikasnosti insekticida protiv lokalnih vektora i razumijevanje kako upotreba kućnih insekticida utiče na evolucijsku selekciju otpornosti na insekticide.
Dodatna metoda 1 pruža detaljne upute korak po korak za provođenje našeg programa testiranja aerosolnih insekticida.
Iako smjernice SZO preporučuju upotrebu automatskih nebulizatora, one ne daju specifične tehničke specifikacije. Upotreba automatskih nebulizatora je ključna, jer ručna nebulizacija u komori s propilen glikolom nije samo radno intenzivna, već može uzrokovati i prostorne nedosljednosti i varijacije u trajanju nebulizacije.
Reakcijska komora se mora sterilizirati nakon svakog testa, ali metoda unutrašnjeg čišćenja preporučena u smjernicama SZO uključuje primjenu vode iz crijeva. U našem svakodnevnom radu, ova metoda je najzahtjevniji korak u radu bioanalitičke opreme, pa smo razvili i testirali postupak sterilizacije na bazi brisa.
Uklonjivi dijelovi ventilatora tretiraju se kao što je gore opisano, a lopatice i okvir ventilatora čiste se spužvom natopljenom 5%-tnom otopinom Decon 90.
Na osnovu odnosa između trajanja prskanja i brzine isporuke proizvoda, naš aerosolni raspršivač je također pokazao dobru tačnost u kontroli odnosa doze aerosola, barem u testiranom rasponu od 1 do 4 puta. Kao što je prikazano na slici 3b, ova karakteristika je posebno važna za karakterizaciju odnosa doze i odgovora novih aerosolnih formulacija ili određivanje identifikacijske doze za otkrivanje otpornosti na insekticide.
Pokazujemo da je naš revidirani protokol za procjenu kućnih aerosolnih insekticida, korištenjem dezinfekcije briseva, dvostrukih kaveza, daljinski upravljanih raspršivača i biometrijskog snimanja akcijskim kamerama, učinkovitija i izvodljivija alternativa trenutnim...SZOpreporuke. Metoda dezinfekcije brisom, koja zahtijeva samo 20 minuta, značajno štedi vrijeme u poređenju sa postojećim protokolom (koji obično zahtijeva jedan sat po ispitnoj komori). Također smanjuje vrijeme koje operateri provode noseći punu ličnu zaštitnu opremu (npr. respiratorne kacige i antistatičku radnu odjeću). Nadalje, ova metoda generira manje kontaminirane tekućine i odjeće za tretman nego potpuno čišćenje ispitne komore, čime se minimizira potencijal za kontaminaciju prostorije u kojoj se nalazi ispitna komora. Metoda dezinfekcije brisom je također pogodna za dezinfekciju polutrajnih ispitnih prostorija koje zahtijevajuminimalnoraspored namještaja u različitim rasporedima prostorija.
Ključno pitanje istraženo u ovoj i drugim studijama je standardizacija doza izloženosti insekticidima primijenjenim u okolišu u različitim protokolima testiranja. Kao što je prikazano na Slici 2b, uprkos fiksnom trajanju prskanja, volumen prskanja varirao je u zavisnosti od vrste aerosolnih limenki, što potencijalno odražava razlike u proizvodnim procesima (npr. unutrašnji pritisak, upotreba potisnog plina, struktura mlaznice itd.). Nadalje, trenutni nedostatak komercijalno dostupnih uređaja za daljinsko prskanje s potrebnom fleksibilnošću u trajanju prskanja ograničava njihovu upotrebu u procjeni odnosa doza-odgovor za suzbijanje komaraca. Ručno prskanje kroz testne otvore ili pristupne otvore (ako su dostupni) može dovesti do varijacija u dozama izloženosti. U stvari, naši rezultati ističu potrebu i važnost smanjenja ovih izvora varijacija. Kod rezistentnih populacija Aedes aegypti, uočili smo korelaciju između doze aerosola i konačnog određivanja osjetljivosti ili otpornosti (Slika 3b). Idealno bi bilo da doze aerosola budu standardizirane u gramima aerosolizirane supstance, a ne u trajanju aerosolizacije, kako bi se olakšala poređenja između različitih studija.
RCAD nudi alternativni pristup za buduća istraživanja koji minimizira utjecaj varijacija procesa. Iako smo utvrdili da standardizacija aerosolnih sprejeva nije izvodljiva, pokazali smo da se masa aerosola isporučenog kroz različite aerosolne limenke može reproducibilno procijeniti kalibriranjem dužine spreja (Slike 2b, 3a). Takva standardizacija koncentracije aerosola u bilo kojoj ispitnoj komori ključna je za poboljšanje reproducibilnosti rezultata.
Na osnovu našeg iskustva i iskustva drugih istraživačkih grupa, preporuke sadržane u trenutnim Smjernicama u vezi s upotrebom metoda detekcije aerosola za testiranje komaraca koji slobodno lete predstavljaju značajne logističke izazove za laboratorijske i poluterenske studije. Na primjer, metode detekcije komaraca koji slobodno lete imaju vrlo nizak protok (uključujući radno intenzivno ponovno hvatanje preživjelih komaraca koji slobodno lete) i pate od niza tehničkih ograničenja, kao što su poteškoće u određivanju stope ubijanja u stvarnom vremenu.
Iako naš validirani eksperiment s dvostrukim kavezom rješava problem ograničenja protoka i predstavlja izvodljivu metodu za provjeru osjetljivosti komaraca na aerosolne insekticide, treba napomenuti da su stope smrtnosti komaraca s Kajmanskih otoka bile značajno niže u eksperimentu s kavezom nego u eksperimentu slobodnog leta (slika 5c, tablica 1). Ova razlika može odražavati smanjenje doze insekticida unutar kaveza, jer manje kapljica aerosola prodire kroz mrežu i ulazi u kavez. Buduće studije bi mogle koristiti tkanine s većim mrežama i dizajne kaveza s većim brzinama protoka zraka ventilatora (npr. cilindrični dizajni) kako bi se dodatno potvrdili rezultati dobiveni različitim eksperimentalnim metodama.
Vrijeme objave: 02.02.2026.