Biljni i patogeni materijali
Dr. Pat Brown sa Univerziteta Illinois (sada na UC Davisu) obezbijedio je mapiranje populacije sirka asocijacije poznato kao populacija konverzije sirka (SCP).Ranije je opisano i predstavlja kolekciju različitih linija pretvorenih u fotoperiodne neosjetljivosti i manjeg rasta kako bi se olakšao rast i razvoj biljaka u američkim sredinama.U ovom istraživanju korišćeno je 510 linija iz ove populacije, iako zbog loše klijavosti i drugih problema kontrole kvaliteta, nisu sve linije korišćene u analizi sva tri svojstva.Konačno, podaci iz 345 linija su korišteni za analizu hitin odgovora, 472 linije za flg22 odgovor i 456 za TLS rezistenciju.B. cookieisoj LSLP18 je dobijen od dr. Burta Bluhma sa Univerziteta u Arkanzasu.
MAMP mjerenje odgovora
Dva različita MAMP-a su korištena u ovoj studiji flg22, (Genscript catalog# RP19986) i hitin.Biljke sirka su uzgajane u umetcima položenim na ravne površine ispunjene zemljom (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) u stakleniku.Biljke su zalijevane dan prije uzimanja uzoraka kako bi se izbjegla dodatna vlaga lišća na dan sakupljanja.
Linije su randomizirane i, iz logističkih razloga, posađene su u serijama od 60 linija.Za svaku liniju posađene su tri 'saksije' sa dva semena po liniji.Naredne serije su zasađene čim je prethodna serija bila obrađena dok se ne procijeni cjelokupna populacija.Provedena su dva eksperimentalna ciklusa za oba MAMP-a sa genotipovima koji su ponovo randomizirani u svakom od dva ciklusa.
ROS testovi su izvedeni kako je prethodno opisano.Ukratko, za svaku liniju posađeno je šest sjemenki u 3 različite posude.Od dobijenih sadnica, tri su odabrane na osnovu ujednačenosti.Sadnice koje su izgledale neobično ili su bile znatno više ili niže od većine nisu korištene.Četiri lisna diska promjera 3 mm su izrezana iz najšireg dijela 4. lista tri različite biljke sirka stare 15 dana.Jedan disk po listu od dvije biljke i dva diska od jedne biljke, s tim da drugi disk postaje kontrola vode (vidi dolje).Diskovi su pojedinačno plutani na 50 µl H20 u crnoj ploči sa 96 jažica, zapečaćeni aluminijumskom zaptivkom da bi se izbeglo izlaganje svetlosti i držani na sobnoj temperaturi preko noći.Sljedećeg jutra napravljena je reakcijska otopina korištenjem 2 mg/ml hemiluminiscentne sonde L-012 (Wako, kataloški br. 120-04891), 2 mg/ml peroksidaze hrena (tip VI-A, Sigma-Aldrich, kataloški broj P6782) i 100 mg/ml hitina ili 2 μM Flg22.50 µl ove reakcione otopine je dodano u tri od četiri jažice.Četvrta jažica je bila lažna kontrola, u koju je dodan reakcioni rastvor isključujući MAMP.Četiri prazna bunara koja sadrže samo vodu su takođe uključena u svaku ploču.
Nakon dodavanja reakcionog rastvora, luminiscencija je merena korišćenjem SynergyTM 2 multi-detekcionog čitača mikroploča (BioTek) svake 2 minute tokom 1 sata.Čitač ploča vrši mjerenja luminiscencije svake 2 minute tokom ovog 1 h.Zbir svih 31 očitavanja je izračunat kako bi se dobila vrijednost za svaki bunar.Procijenjena vrijednost za MAMP odgovor za svaki genotip izračunata je kao (prosječna vrijednost luminiscencije tri eksperimentalna jažica—vrijednost lažne jažice) minus prosječna vrijednost slijepe jažice.Vrijednosti prazne bušotine su konstantno bile blizu nule.
Listovi diskovaNicotiana benthamiana, jedna linija sirka sa visokim odzivom (SC0003) i jedna linija sirka sa niskim odzivom (PI 6069) su takođe uključene kao kontrole u svaku ploču sa 96 jažica u svrhu kontrole kvaliteta.
B. cookieipriprema inokuluma i inokulacija
B. cookieiinokulum je pripremljen kako je prethodno opisano.Ukratko, zrna sirka su namočena u vodi tri dana, isprana, sipana u konične tikvice od 1L i autoklavirana sat vremena na 15 psi i 121 °C.Zrna su zatim inokulirana sa oko 5 ml maceriranog micelija iz svježe kultureB. cookieiLSLP18 izoluje i ostavi 2 nedelje na sobnoj temperaturi, protresajući tikvice svaka 3 dana.Nakon 2 sedmice, zrna sirka zaražena gljivama su osušena na zraku i zatim pohranjena na 4 °C do inokulacije na polju.Isti inokulum je korišten za cijelo ispitivanje i svake godine je bio svjež.Za inokulaciju, 6-10 zaraženih zrna stavljeno je u kolobar 4-5 sedmica starih biljaka sirka.Spore proizvedene iz ovih gljiva inicirali su infekciju u mladim biljkama sirka u roku od nedelju dana.
Priprema semena
Prije sadnje u polju sjeme sirka tretirano je mješavinom fungicida, insekticida i zaštitnog sredstva koja sadrži ~ 1% fungicida Spirato 480 FS, 4% fungicida Sebring 480 FS, 3% zaštitnog sredstva za sjeme Sorpro 940 ES.Zatim se sjeme suši na zraku 3 dana čime se dobije tanak sloj ove mješavine oko sjemena.Zaštitnik je omogućio upotrebu herbicida Dual Magnum kao tretman prije nicanja.
Procjena otpornosti ciljne lisne pjegavosti
SCP je zasađen u Centralnoj istraživačkoj stanici za usjeve u Claytonu, NC 14. – 15. juna 2017. i 20. juna 2018. u randomiziranom kompletnom blok dizajnu s dvije eksperimentalne replike u svakom slučaju.Eksperimenti su zasađeni u jednoredovima od 1,8 m sa širinom reda od 0,9 m sa 10 semena po parceli.Dva rubna reda su zasađena oko periferije svakog eksperimenta kako bi se spriječili efekti rubova.Eksperimenti su inokulirani 20. jula 2017. i 20. jula 2018. godine kada su biljke sirka bile u fazi rasta 3. Ocene su uzete na skali od jedan do devet, gde su biljke koje nisu pokazivale znakove bolesti ocenjene sa devet i potpuno mrtve biljke su ocijenjene kao jedna.Dvije ocjene su napravljene 2017. i četiri očitavanja u 2018. počevši dvije sedmice nakon inokulacije svake godine.sAUDPC (standardizovana površina ispod krivulje progresije bolesti) je izračunata kako je prethodno opisano.
Vrijeme objave: Apr-01-2021