U prethodnom projektu testiranja lokalnih pogona za preradu hrane na komarce u Tajlandu, utvrđeno je da eterična ulja (EO) Cyperus rotundus, galangala i cimeta imaju dobru aktivnost protiv komaraca protiv Aedes aegypti. U pokušaju da se smanji upotreba tradicionalnihinsekticidii poboljšati kontrolu populacija otpornih komaraca, ova studija imala je za cilj identificirati potencijalni sinergizam između adulticidnih učinaka etilen oksida i toksičnosti permetrina za komarce vrste Aedes aegypti, uključujući sojeve otporne na piretroide i osjetljive sojeve.
Cilj je bio procijeniti hemijski sastav i aktivnost ubijanja EO ekstrahiranog iz rizoma C. rotundus i A. galanga te kore C. verum protiv osjetljivog soja Muang Chiang Mai (MCM-S) i rezistentnog soja Pang Mai Dang (PMD-R). Aktivni odrasli Ae. Aedes aegypti. Biološki test smjese EO-permetrina na odraslim komarcima također je proveden na ovim sojevima Aedes kako bi se razumjela njegova sinergistička aktivnost.
Hemijska karakterizacija korištenjem GC-MS analitičke metode pokazala je da je identificirano 48 spojeva iz EO C. rotundus, A. galanga i C. verum, što čini 80,22%, 86,75% i 97,24% ukupnih komponenti, respektivno. Ciperen (14,04%), β-bisabolen (18,27%) i cinamaldehid (64,66%) su glavne komponente ulja cyperusa, ulja galangala i balzamičnog ulja, respektivno. U biološkim testovima ubijanja odraslih jedinki, EO C. rotundus, A. galanga i C. verum bili su efikasni u ubijanju Ae. aegypti, vrijednosti LD50 MCM-S i PMD-R bile su 10,05 i 9,57 μg/mg ženki, 7,97 i 7,94 μg/mg ženki, te 3,30 i 3,22 μg/mg ženki, respektivno. Efikasnost MCM-S i PMD-R Ae u ubijanju odraslih jedinki *aegypti* kod ovih EO bila je bliska piperonil butoksidu (PBO vrijednosti, LD50 = 6,30 i 4,79 μg/mg ženki, respektivno), ali ne toliko izražena kao permetrin (LD50 vrijednosti = 0,44 i 3,70 ng/mg ženki, respektivno). Međutim, kombinovani biološki testovi su pronašli sinergiju između EO i permetrina. Značajan sinergizam s permetrinom protiv dva soja komaraca *Aedes*. *Aedes aegypti* je zabilježen u EM kod *C. rotundus* i *A. galanga*. Dodavanje ulja *C. rotundus* i *A. galanga* značajno je smanjilo LD50 vrijednosti permetrina na MCM-S sa 0,44 na 0,07 ng/mg i 0,11 ng/mg kod ženki, respektivno, sa vrijednostima sinergističkog omjera (SR) od 6,28 i 4,00, respektivno. Osim toga, EO C. rotundus i A. galanga su također značajno smanjili LD50 vrijednosti permetrina na PMD-R sa 3,70 na 0,42 ng/mg i 0,003 ng/mg kod ženki, respektivno, sa SR vrijednostima od 8,81 i 1233,33, respektivno.
Sinergijski učinak kombinacije EO-permetrina za povećanje toksičnosti za odrasle protiv dva soja komaraca Aedes. Aedes aegypti pokazuje obećavajuću ulogu etilen oksida kao sinergista u poboljšanju efikasnosti protiv komaraca, posebno tamo gdje su tradicionalni spojevi neefikasni ili neprikladni.
Komarac Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) je glavni vektor dengue groznice i drugih zaraznih virusnih bolesti poput žute groznice, čikungunje i virusa Zika, što predstavlja ogromnu i trajnu prijetnju ljudima [1, 2]. Virus dengue je najozbiljnija patogena hemoragijska groznica koja pogađa ljude, sa procijenjenih 5-100 miliona slučajeva godišnje i više od 2,5 milijarde ljudi širom svijeta u riziku [3]. Izbijanja ove zarazne bolesti predstavljaju ogroman teret za stanovništvo, zdravstvene sisteme i ekonomije većine tropskih zemalja [1]. Prema podacima Ministarstva zdravstva Tajlanda, u 2015. godini širom zemlje zabilježeno je 142.925 slučajeva dengue groznice i 141 smrtni slučaj, što je više od tri puta više od broja slučajeva i smrtnih slučajeva u 2014. godini [4]. Uprkos historijskim dokazima, dengue groznica je iskorijenjena ili znatno smanjena zahvaljujući komarcu Aedes. Nakon suzbijanja Aedes aegypti [5], stope zaraze su se dramatično povećale i bolest se proširila svijetom, dijelom zbog decenija globalnog zagrijavanja. Eliminacija i suzbijanje Ae. Aedes aegypti je relativno teško jer je to domaći komarac vektor koji se pari, hrani, odmara i polaže jaja u i oko ljudskih nastambi tokom dana. Osim toga, ovaj komarac ima sposobnost prilagođavanja promjenama u okolini ili poremećajima uzrokovanim prirodnim događajima (kao što je suša) ili ljudskim mjerama kontrole, te se može vratiti na svoj prvobitni broj [6, 7]. Budući da su vakcine protiv dengue groznice tek nedavno odobrene i ne postoji specifičan tretman za dengue groznicu, sprječavanje i smanjenje rizika od prijenosa dengue groznice u potpunosti ovisi o kontroli komaraca vektora i eliminaciji ljudskog kontakta s vektorima.
Posebno, upotreba hemikalija za suzbijanje komaraca sada igra važnu ulogu u javnom zdravlju kao važna komponenta sveobuhvatnog integriranog upravljanja vektorima. Najpopularnije hemijske metode uključuju upotrebu niskotoksičnih insekticida koji djeluju protiv larvi komaraca (larvicidi) i odraslih komaraca (adidocidi). Suzbijanje larvi smanjenjem izvora i redovnom upotrebom hemijskih larvicida kao što su organofosfati i regulatori rasta insekata smatra se važnim. Međutim, negativni utjecaji na okoliš povezani sa sintetičkim pesticidima i njihovim radno intenzivnim i složenim održavanjem ostaju glavna briga [8, 9]. Tradicionalna aktivna kontrola vektora, poput kontrole odraslih, ostaje najefikasnije sredstvo kontrole tokom virusnih epidemija jer može brzo i u velikim razmjerima iskorijeniti vektore zaraznih bolesti, kao i smanjiti životni vijek i dugovječnost lokalnih populacija vektora [3]. , 10]. Četiri klase hemijskih insekticida: organohlorini (koji se nazivaju samo DDT), organofosfati, karbamati i piretroidi čine osnovu programa kontrole vektora, pri čemu se piretroidi smatraju najuspješnijom klasom. Vrlo su efikasni protiv raznih člankonožaca i imaju nisku efikasnost. toksičnost za sisare. Trenutno, sintetički piretroidi čine većinu komercijalnih pesticida, čineći oko 25% globalnog tržišta pesticida [11, 12]. Permetrin i deltametrin su piretroidni insekticidi širokog spektra koji se decenijama koriste širom svijeta za suzbijanje raznih štetočina od poljoprivrednog i medicinskog značaja [13, 14]. Pedesetih godina 20. vijeka, DDT je odabran kao hemikalija izbora za tajlandski nacionalni program suzbijanja komaraca u javnom zdravstvu. Nakon široko rasprostranjene upotrebe DDT-a u područjima endemskim za malariju, Tajland je postepeno ukinuo upotrebu DDT-a između 1995. i 2000. godine i zamijenio ga sa dva piretroida: permetrinom i deltametrinom [15, 16]. Ovi piretroidni insekticidi uvedeni su početkom 1990-ih za suzbijanje malarije i denga groznice, prvenstveno putem tretmana mrežama za spavanje i upotrebom termalne magle i sprejeva ultra niske toksičnosti [14, 17]. Međutim, izgubili su na efikasnosti zbog jake otpornosti komaraca i nedostatka javne usklađenosti s propisima zbog zabrinutosti za javno zdravlje i utjecaj sintetičkih hemikalija na okoliš. To predstavlja značajne izazove za uspjeh programa kontrole vektora prijetnji [14, 18, 19]. Da bi strategija bila efikasnija, neophodne su pravovremene i odgovarajuće protumjere. Preporučeni postupci upravljanja uključuju zamjenu prirodnih supstanci, rotaciju hemikalija različitih klasa, dodavanje sinergista i miješanje hemikalija ili istovremenu primjenu hemikalija različitih klasa [14, 20, 21]. Stoga postoji hitna potreba za pronalaženjem i razvojem ekološki prihvatljive, praktične i efikasne alternative i sinergista, a ova studija ima za cilj da odgovori na ovu potrebu.
Insekticidi prirodnog porijekla, posebno oni na bazi biljnih komponenti, pokazali su potencijal u evaluaciji trenutnih i budućih alternativa za suzbijanje komaraca [22, 23, 24]. Nekoliko studija je pokazalo da je moguće kontrolirati važne vektore komaraca korištenjem biljnih proizvoda, posebno eteričnih ulja (EO), kao sredstava za ubijanje odraslih komaraca. Adulticidna svojstva protiv nekih važnih vrsta komaraca pronađena su u mnogim biljnim uljima kao što su celer, kumin, zedoarija, anis, cimet, timijan, Schinus terebinthifolia, Cymbopogon citratus, Cymbopogon schoenanthus, Cymbopogon giganteus, Chenopodium ambrosioides, Cochlospermum planchonii, Eucalyptus ter eticornis, Eucalyptus citriodora, Cananga odorata i Petroselinum Criscum [25,26,27,28,29,30]. Etilen oksid se sada koristi ne samo samostalno, već i u kombinaciji s ekstrahiranim biljnim supstancama ili postojećim sintetičkim pesticidima, proizvodeći različite stepene toksičnosti. Kombinacije tradicionalnih insekticida kao što su organofosfati, karbamati i piretroidi s etilen oksidom/biljnim ekstraktima djeluju sinergijski ili antagonistički u svojim toksičnim efektima i pokazale su se učinkovitima protiv vektora bolesti i štetočina [31,32,33,34,35]. Međutim, većina studija o sinergijskim toksičnim efektima kombinacija fitokemikalija sa ili bez sintetičkih hemikalija provedena je na poljoprivrednim insektima vektorima i štetočinama, a ne na medicinski važnim komarcima. Štaviše, većina radova o sinergijskim efektima kombinacija biljnih i sintetičkih insekticida protiv vektora komaraca fokusirala se na larvicidni efekat.
U prethodnoj studiji koju su autori proveli kao dio tekućeg istraživačkog projekta skrininga intimicida s autohtonih prehrambenih biljaka u Tajlandu, utvrđeno je da etilen oksidi iz Cyperus rotundus, galangala i cimeta imaju potencijalnu aktivnost protiv odraslih Aedes. Egipat [36]. Stoga je ova studija imala za cilj procijeniti učinkovitost EO izoliranih iz ovih ljekovitih biljaka protiv komaraca Aedes. aegypti, uključujući sojeve otporne i osjetljive na piretroide. Sinergijski učinak binarnih mješavina etilen oksida i sintetičkih piretroida s dobrom učinkovitošću kod odraslih također je analiziran kako bi se smanjila upotreba tradicionalnih insekticida i povećala otpornost na vektore komaraca, posebno protiv Aedes. Aedes aegypti. Ovaj članak izvještava o kemijskoj karakterizaciji učinkovitih eteričnih ulja i njihovom potencijalu da povećaju toksičnost sintetičkog permetrina protiv komaraca Aedes. aegypti kod sojeva osjetljivih na piretroide (MCM-S) i rezistentnih sojeva (PMD-R).
Rizomi C. rotundus i A. galanga te kora C. verum (Sl. 1) korišteni za ekstrakciju esencijalnog ulja kupljeni su od dobavljača biljnih lijekova u provinciji Chiang Mai, Tajland. Naučna identifikacija ovih biljaka postignuta je kroz konsultacije s g. Jamesom Franklinom Maxwellom, herbarijskim botaničarom, Odsjeka za biologiju, Fakulteta prirodnih nauka, Univerziteta Chiang Mai (CMU), provincija Chiang Mai, Tajland, i naučnikom Wannari Charoensap; na Odsjeku za farmaciju, Farmaceutskog fakulteta, Univerziteta Carnegie Mellon, gđom. Voucher. Uzorci svake biljke čuvaju se na Odsjeku za parazitologiju Medicinskog fakulteta Univerziteta Carnegie Mellon za buduću upotrebu.
Uzorci biljaka sušeni su pojedinačno u sjeni 3-5 dana na otvorenom prostoru s aktivnom ventilacijom i temperaturom okoline od približno 30 ± 5 °C kako bi se uklonio sadržaj vlage prije ekstrakcije prirodnih eteričnih ulja (EO). Ukupno 250 g svakog suhog biljnog materijala mehanički je samljeveno u grubi prah i korišteno za izolaciju eteričnih ulja (EO) parnom destilacijom. Aparat za destilaciju sastojao se od električnog grijača, tikvice s okruglim dnom od 3000 mL, ekstrakcijske kolone, kondenzatora i Cool ace uređaja (Eyela Cool Ace CA-1112 CE, Tokyo Rikakikai Co. Ltd., Tokio, Japan). U tikvicu se doda 1600 ml destilirane vode i 10-15 staklenih kuglica, a zatim se zagrijava na približno 100 °C pomoću električnog grijača najmanje 3 sata dok se destilacija ne završi i dok se više ne proizvodi EO. EO sloj je odvojen od vodene faze pomoću lijevka za odvajanje, osušen iznad bezvodnog natrijum sulfata (Na2SO4) i pohranjen u zatvorenoj smeđoj boci na 4°C dok se ne ispita hemijski sastav i aktivnost odraslih jedinki.
Hemijski sastav eteričnih ulja proveden je istovremeno s biološkim testom za odraslu supstancu. Kvalitativna analiza provedena je korištenjem GC-MS sistema koji se sastoji od Hewlett-Packard (Wilmington, CA, SAD) 7890A plinskog kromatografa opremljenog jednim kvadrupolnim detektorom za selektivnu masu (Agilent Technologies, Wilmington, CA, SAD) i MSD 5975C (EI) (Agilent Technologies).
Hromatografska kolona – DB-5MS (30 m × ID 0,25 mm × debljina filma 0,25 µm). Ukupno vrijeme rada GC-MS bilo je 20 minuta. Uslovi analize su da su temperature injektora i transferne linije 250 i 280 °C, respektivno; temperatura peći je podešena da se povećava sa 50°C na 250°C brzinom od 10°C/min, gas nosač je helijum; brzina protoka 1,0 ml/min; zapremina injektiranja je 0,2 µL (1/10% po volumenu u CH2Cl2, odnos podjele 100:1); Za GC-MS detekciju koristi se sistem jonizacije elektrona sa energijom jonizacije od 70 eV. Raspon akvizicije je 50–550 atomskih masenih jedinica (amu), a brzina skeniranja je 2,91 skeniranja u sekundi. Relativni procenti komponenti izraženi su kao procenti normalizovani površinom vrha. Identifikacija EO sastojaka zasniva se na njihovom indeksu zadržavanja (RI). RI je izračunat korištenjem jednačine Van den Doola i Kratza [37] za seriju n-alkana (C8-C40) i upoređen s indeksima zadržavanja iz literature [38] i bibliotečkih baza podataka (NIST 2008 i Wiley 8NO8). Identitet prikazanih spojeva, kao što su struktura i molekularna formula, potvrđen je poređenjem s dostupnim autentičnim uzorcima.
Analitički standardi za sintetički permetrin i piperonil butoksid (PBO, pozitivna kontrola u sinergijskim studijama) kupljeni su od Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, SAD). Kompleti za testiranje odraslih Svjetske zdravstvene organizacije (WHO) i dijagnostičke doze papira impregniranog permetrinom (0,75%) komercijalno su kupljeni od Centra za kontrolu vektora WHO u Penangu, Malezija. Sve ostale korištene hemikalije i reagensi bili su analitičke čistoće i kupljeni su od lokalnih institucija u provinciji Chiang Mai, Tajland.
Komarci korišteni kao testni organizmi u biološkom testu za odrasle jedinke bili su slobodno pareći laboratorijski komarci vrste Aedes aegypti, uključujući osjetljivi soj Muang Chiang Mai (MCM-S) i rezistentni soj Pang Mai Dang (PMD-R). Soj MCM-S je dobiven iz lokalnih uzoraka prikupljenih u području Muang Chiang Mai, provincija Chiang Mai, Tajland, i čuva se u entomološkoj sobi Odjela za parazitologiju Medicinskog fakulteta CMU od 1995. godine [39]. Soj PMD-R, za koji je utvrđeno da je otporan na permetrin, izoliran je iz poljskih komaraca prvobitno prikupljenih iz Ban Pang Mai Dang, okrug Mae Tang, provincija Chiang Mai, Tajland, i čuva se u istom institutu od 1997. godine [40]. Sojevi PMD-R su uzgajani pod selektivnim pritiskom kako bi se održali nivoi otpornosti povremenim izlaganjem 0,75% permetrinu korištenjem WHO kompleta za detekciju s nekim modifikacijama [41]. Svaki soj Ae. Aedes aegypti je koloniziran pojedinačno u laboratoriji bez patogena na temperaturi od 25 ± 2 °C i relativnoj vlažnosti od 80 ± 10% te fotoperiodu od 14:10 sati. Otprilike 200 larvi držano je u plastičnim posudama (dužine 33 cm, širine 28 cm i visine 9 cm) napunjenim vodom iz slavine, u gustoći od 150-200 larvi po posudi i hranjene dva puta dnevno steriliziranim psećim keksima. Odrasle gliste držane su u vlažnim kavezima i kontinuirano hranjene 10% vodenim rastvorom saharoze i 10% rastvorom multivitaminskog sirupa. Ženke komaraca redovno sišu krv kako bi položile jaja. Ženke stare od dva do pet dana koje nisu hranjene krvlju mogu se kontinuirano koristiti u eksperimentalnim biološkim testovima na odraslim jedinkama.
Biološki test odnosa doze i mortaliteta EO proveden je na odraslim ženkama komaraca Aedes. aegypti, MCM-S i PMD-R korištenjem lokalne metode modificirane prema standardnom protokolu WHO za testiranje osjetljivosti [42]. EO iz svake biljke serijski je razrjeđivan odgovarajućim rastvaračem (npr. etanolom ili acetonom) kako bi se dobila graduirana serija od 4-6 koncentracija. Nakon anestezije ugljičnim dioksidom (CO2), komarci su pojedinačno vagani. Anestezirani komarci su zatim nepomično držani na suhom filter papiru na prilagođenoj hladnoj ploči pod stereomikroskopom kako bi se spriječila reaktivacija tokom postupka. Za svaki tretman, 0,1 μl rastvora EO naneseno je na gornji pronotum ženki pomoću ručnog mikrodispenzera Hamilton (700 Series Microliter™, Hamilton Company, Reno, NV, SAD). Dvadeset pet ženki tretirano je svakom koncentracijom, sa mortalitetom u rasponu od 10% do 95% za najmanje 4 različite koncentracije. Komarci tretirani rastvaračem služili su kao kontrola. Da biste spriječili kontaminaciju testnih uzoraka, zamijenite filter papir novim filter papirom za svaki testirani EO. Doze korištene u ovim biološkim testovima izražene su u mikrogramima EO po miligramu tjelesne težine žive ženke. Aktivnost odraslih PBO također je procijenjena na sličan način kao i EO, pri čemu je PBO korišten kao pozitivna kontrola u sinergijskim eksperimentima. Tretirani komarci u svim grupama stavljeni su u plastične čaše i dato im je 10% saharoze plus 10% multivitaminskog sirupa. Svi biološki testovi provedeni su na 25 ± 2 °C i 80 ± 10% relativne vlažnosti i ponovljeni četiri puta s kontrolama. Mortalitet tokom 24-satnog perioda uzgoja provjeren je i potvrđen nedostatkom odgovora komaraca na mehaničku stimulaciju, a zatim zabilježen na osnovu prosjeka četiri ponavljanja. Eksperimentalni tretmani ponovljeni su četiri puta za svaki testni uzorak koristeći različite serije komaraca. Rezultati su sumirani i korišteni za izračunavanje procentualne stope mortaliteta, koja je korištena za određivanje 24-satne smrtonosne doze probit analizom.
Sinergijski anticidni učinak EO i permetrina procijenjen je korištenjem postupka lokalnog ispitivanja toksičnosti [42] kao što je prethodno opisano. Za pripremu permetrina u željenoj koncentraciji korišten je aceton ili etanol kao otapalo, kao i binarna smjesa EO i permetrina (EO-permetrin: permetrin pomiješan s EO u koncentraciji LD25). Testni kompleti (permetrin i EO-permetrin) procijenjeni su u odnosu na MCM-S i PMD-R sojeve Ae. Aedes aegypti. Svakoj od 25 ženki komaraca date su četiri doze permetrina kako bi se testirala njegova učinkovitost u ubijanju odraslih jedinki, a svaki tretman ponovljen je četiri puta. Da bi se identificirali kandidati za EO sinergiste, svakoj od 25 ženki komaraca date su 4 do 6 doza EO-permetrina, a svaka primjena ponovljena je četiri puta. Tretman PBO-permetrinom (permetrin pomiješan s koncentracijom PBO u koncentraciji LD25) također je poslužio kao pozitivna kontrola. Doze korištene u ovim biološkim testovima izražene su u nanogramima testnog uzorka po miligramu tjelesne težine žive ženke. Četiri eksperimentalne evaluacije za svaki soj komaraca provedene su na pojedinačno uzgojenim serijama, a podaci o smrtnosti su objedinjeni i analizirani korištenjem Probita kako bi se odredila 24-satna smrtonosna doza.
Stopa smrtnosti je prilagođena korištenjem Abbottove formule [43]. Prilagođeni podaci su analizirani Probit regresijskom analizom korištenjem programa za računarsku statistiku SPSS (verzija 19.0). Letalne vrijednosti od 25%, 50%, 90%, 95% i 99% (LD25, LD50, LD90, LD95 i LD99, respektivno) su izračunate korištenjem odgovarajućih 95% intervala pouzdanosti (95% CI). Mjerenja značajnosti i razlike između testiranih uzoraka procijenjene su korištenjem hi-kvadrat testa ili Mann-Whitney U testa unutar svakog biološkog testa. Rezultati su smatrani statistički značajnim pri P< 0,05. Koeficijent otpora (RR) se procjenjuje na nivou LD50 korištenjem sljedeće formule [12]:
RR > 1 označava otpornost, a RR ≤ 1 označava osjetljivost. Vrijednost sinergijskog omjera (SR) svakog kandidata za sinergizam izračunava se na sljedeći način [34, 35, 44]:
Ovaj faktor dijeli rezultate u tri kategorije: vrijednost SR od 1±0,05 smatra se da nema vidljivog efekta, vrijednost SR >1,05 smatra se da ima sinergijski efekat, a vrijednost SR od . Svijetložuto tečno ulje može se dobiti parnom destilacijom rizoma C. rotundus i A. galanga i kore C. verum. Prinosi izračunati na suhu težinu bili su 0,15%, 0,27% (w/w) i 0,54% (v/v) w) respektivno (Tabela 1). GC-MS studija hemijskog sastava ulja C. rotundus, A. galanga i C. verum pokazala je prisustvo 19, 17 i 21 jedinjenja, što je činilo 80,22, 86,75 i 97,24% svih komponenti, respektivno (Tabela 2). Spojevi ulja rizoma C. lucidum uglavnom se sastoje od ciperonena (14,04%), zatim karalena (9,57%), α-kapselana (7,97%) i α-kapselana (7,53%). Glavna hemijska komponenta ulja rizoma galangala je β-bisabolen (18,27%), zatim α-bergamotena (16,28%), 1,8-cineola (10,17%) i piperonola (10,09%). Dok je cinamaldehid (64,66%) identificiran kao glavna komponenta ulja kore C. verum, cinamični acetat (6,61%), α-kopan (5,83%) i 3-fenilpropionaldehid (4,09%) smatrani su sporednim sastojcima. Hemijske strukture cipernena, β-bisabolena i cinamaldehida su glavni spojevi C. rotundus, A. galanga i C. verum, respektivno, kao što je prikazano na Slici 2.
Rezultati triju OO-a koji su procijenili aktivnost odraslih jedinki protiv komaraca vrste Aedes. (Aedes aegypti) prikazani su u Tabeli 3. Utvrđeno je da svi EO imaju smrtonosne efekte na komarce vrste MCM-S Aedes pri različitim vrstama i dozama. (Aedes aegypti). Najefikasniji EO je C. verum, a slijede ga A. galanga i C. rotundus sa LD50 vrijednostima od 3,30, 7,97 i 10,05 μg/mg za ženke MCM-S, respektivno, što je nešto više od 3,22 (U = 1), Z = -0,775, P = 0,667), 7,94 (U = 2, Z = 0, P = 1) i 9,57 (U = 0, Z = -1,549, P = 0,333) μg/mg PMD-R kod žena. Ovo odgovara činjenici da PBO ima nešto veći učinak na odrasle jedinke na PMD-R nego soj MSM-S, sa LD50 vrijednostima od 4,79 i 6,30 μg/mg ženki, respektivno (U = 0, Z = -2,021, P = 0,057). Može se izračunati da su LD50 vrijednosti C. verum, A. galanga, C. rotundus i PBO protiv PMD-R približno 0,98, 0,99, 0,95 i 0,76 puta niže od onih protiv MCM-S, respektivno. Dakle, ovo ukazuje na to da je osjetljivost na PBO i EO relativno slična između dva soja Aedes. Iako je PMD-R bio osjetljiviji od MCM-S, osjetljivost Aedes aegypti nije bila značajna. Nasuprot tome, dva soja Aedes su se značajno razlikovala u svojoj osjetljivosti na permetrin aegypti (Tabela 4). PMD-R je pokazao značajnu otpornost na permetrin (LD50 vrijednost = 0,44 ng/mg kod žena) sa višom LD50 vrijednošću od 3,70 u poređenju sa MCM-S (LD50 vrijednost = 0,44 ng/mg kod žena) ng/mg kod žena (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029). Iako je PMD-R mnogo manje osjetljiv na permetrin od MCM-S, njegova osjetljivost na PBO i ulja C. verum, A. galanga i C. rotundus je nešto veća od MCM-S.
Kao što je uočeno u biološkom testu kombinacije EO i permetrina na odrasloj populaciji, binarne smjese permetrina i EO (LD25) pokazale su ili sinergiju (SR vrijednost > 1,05) ili nikakav učinak (SR vrijednost = 1 ± 0,05). Složeni učinci smjese EO i permetrina na odrasle jedinke eksperimentalnih albino komarca. Sojevi Aedes aegypti MCM-S i PMD-R prikazani su u Tabeli 4 i Slici 3. Utvrđeno je da dodatak ulja C. verum neznatno smanjuje LD50 permetrina u odnosu na MCM-S i neznatno povećava LD50 u odnosu na PMD-R na 0,44–0,42 ng/mg kod žena i sa 3,70 na 3,85 ng/mg kod žena. Nasuprot tome, dodatak ulja C. rotundus i A. galanga značajno je smanjio LD50 permetrina na MCM-S sa 0,44 na 0,07 (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) i na 0,11 (U = 0, Z) = -2,309, P = 0,029) ng/mg kod žena. Na osnovu LD50 vrijednosti MCM-S, SR vrijednosti smjese EO-permetrin nakon dodavanja ulja C. rotundus i A. galanga bile su 6,28 odnosno 4,00. Shodno tome, LD50 permetrina u odnosu na PMD-R značajno se smanjio sa 3,70 na 0,42 (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) i na 0,003 dodatkom ulja C. rotundus i A. galanga (U = 0). , Z = -2,337, P = 0,029) ng/mg ženki. SR vrijednost permetrina u kombinaciji s C. rotundus u odnosu na PMD-R iznosila je 8,81, dok je SR vrijednost smjese galangal-permetrin iznosila 1233,33. U odnosu na MCM-S, LD50 vrijednost pozitivne kontrole PBO smanjila se sa 0,44 na 0,26 ng/mg (ženke) i sa 3,70 ng/mg (ženke) na 0,65 ng/mg (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) i PMD-R (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029). Vrijednosti SR smješavine PBO-permetrin za sojeve MCM-S i PMD-R bile su 1,69 odnosno 5,69. Ovi rezultati ukazuju na to da ulja C. rotundus i A. galanga te PBO povećavaju toksičnost permetrina u većoj mjeri nego ulje C. verum za sojeve MCM-S i PMD-R.
Aktivnost u odraslim jedinkama (LD50) EO, PBO, permetrina (PE) i njihovih kombinacija protiv sojeva komaraca Aedes osjetljivih na piretroid (MCM-S) i rezistentnih (PMD-R) sojeva komaraca Aedes. Aedes aegypti
[45]. Sintetički piretroidi se koriste širom svijeta za suzbijanje gotovo svih člankonožaca od poljoprivrednog i medicinskog značaja. Međutim, zbog štetnih posljedica upotrebe sintetičkih insekticida, posebno u smislu razvoja i široko rasprostranjene otpornosti komaraca, kao i utjecaja na dugoročno zdravlje i okoliš, sada postoji hitna potreba za smanjenjem upotrebe tradicionalnih sintetičkih insekticida i razvojem alternativa [35, 46, 47]. Pored zaštite okoliša i ljudskog zdravlja, prednosti botaničkih insekticida uključuju visoku selektivnost, globalnu dostupnost i jednostavnost proizvodnje i upotrebe, što ih čini atraktivnijim za suzbijanje komaraca [32, 48, 49]. Ova studija, pored razjašnjavanja hemijskih karakteristika efikasnih eteričnih ulja putem GC-MS analize, također je procijenila potentnost odraslih eteričnih ulja i njihovu sposobnost da povećaju toksičnost sintetičkog permetrina aegypti u sojevima osjetljivim na piretroide (MCM-S) i rezistentnim sojevima (PMD-R).
GC-MS karakterizacija je pokazala da su cipern (14,04%), β-bisabolen (18,27%) i cinamaldehid (64,66%) glavne komponente ulja C. rotundus, A. galanga i C. verum. Ove hemikalije su pokazale različite biološke aktivnosti. Ahn i saradnici [50] su izvijestili da 6-acetoksiciperen, izolovan iz rizoma C. rotundus, djeluje kao antitumorski spoj i može izazvati apoptozu zavisnu od kaspaze u ćelijama raka jajnika. β-Bisabolen, ekstrahovan iz eteričnog ulja drveta mirte, pokazuje specifičnu citotoksičnost protiv ćelija tumora dojke kod ljudi i miševa, kako in vitro tako i in vivo [51]. Prijavljeno je da cinamaldehid, dobijen iz prirodnih ekstrakata ili sintetizovan u laboratoriji, ima insekticidno, antibakterijsko, antifungalno, antiinflamatorno, imunomodulatorno, antikancerogeno i antiangiogeno djelovanje [52].
Rezultati biološkog testa aktivnosti kod odraslih jedinki ovisni o dozi pokazali su dobar potencijal testiranih EO i pokazali su da sojevi komaraca Aedes MCM-S i PMD-R imaju sličnu osjetljivost na EO i PBO. Aedes aegypti. Poređenje efikasnosti EO i permetrina pokazalo je da potonji ima jači alercidni učinak: vrijednosti LD50 su 0,44 i 3,70 ng/mg kod ženki za sojeve MCM-S i PMD-R. Ove nalaze podržavaju mnoge studije koje pokazuju da su prirodni pesticidi, posebno proizvodi biljnog porijekla, uglavnom manje efikasni od sintetičkih supstanci [31, 34, 35, 53, 54]. To može biti zato što je prvi složena kombinacija aktivnih ili neaktivnih sastojaka, dok je drugi pročišćeni pojedinačni aktivni spoj. Međutim, raznolikost i složenost prirodnih aktivnih sastojaka s različitim mehanizmima djelovanja mogu pojačati biološku aktivnost ili ometati razvoj otpornosti u populacijama domaćina [55, 56, 57]. Mnogi istraživači su izvijestili o potencijalu protiv komaraca C. verum, A. galanga i C. rotundus i njihovih komponenti kao što su β-bisabolen, cinamaldehid i 1,8-cineol [22, 36, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64]. Međutim, pregled literature otkrio je da nije bilo ranijih izvještaja o njegovom sinergijskom efektu s permetrinom ili drugim sintetičkim insekticidima protiv komaraca Aedes. Aedes aegypti.
U ovoj studiji, uočene su značajne razlike u osjetljivosti na permetrin između dva soja Aedes. Aedes aegypti. MCM-S je osjetljiv na permetrin, dok je PMD-R mnogo manje osjetljiv na njega, sa stopom otpornosti od 8,41. U poređenju sa osjetljivošću MCM-S, PMD-R je manje osjetljiv na permetrin, ali osjetljiviji na EO, što pruža osnovu za dalja istraživanja usmjerena na povećanje efikasnosti permetrina kombinovanjem sa EO. Sinergistički biološki test zasnovan na kombinaciji za efekte na odrasle sojeve pokazao je da binarne smjese EO i permetrina smanjuju ili povećavaju smrtnost odraslih sojeva Aedes. Aedes aegypti. Dodavanje ulja C. verum neznatno je smanjilo LD50 permetrina u odnosu na MCM-S, ali je neznatno povećalo LD50 u odnosu na PMD-R sa SR vrijednostima od 1,05 i 0,96, respektivno. Ovo ukazuje da ulje C. verum nema sinergistički ili antagonistički efekat na permetrin kada se testira na MCM-S i PMD-R. Nasuprot tome, ulja C. rotundus i A. galanga pokazala su značajan sinergistički učinak značajnim smanjenjem LD50 vrijednosti permetrina na MCM-S ili PMD-R. Kada je permetrin kombinovan sa EO C. rotundus i A. galanga, SR vrijednosti smjese EO-permetrin za MCM-S bile su 6,28 odnosno 4,00. Pored toga, kada je permetrin procijenjen u odnosu na PMD-R u kombinaciji sa C. rotundus (SR = 8,81) ili A. galanga (SR = 1233,33), SR vrijednosti su se značajno povećale. Vrijedi napomenuti da su i C. rotundus i A. galanga značajno povećali toksičnost permetrina protiv PMD-R Ae. aegypti. Slično tome, utvrđeno je da PBO povećava toksičnost permetrina sa SR vrijednostima od 1,69 i 5,69 za sojeve MCM-S i PMD-R, respektivno. Budući da su C. rotundus i A. galanga imali najviše vrijednosti SR, smatrani su najboljim sinergistima u pojačavanju toksičnosti permetrina na MCM-S i PMD-R, respektivno.
Nekoliko prethodnih studija izvijestilo je o sinergističkom efektu kombinacija sintetičkih insekticida i biljnih ekstrakata protiv različitih vrsta komaraca. Larvicidni biološki test protiv Anopheles Stephensi koji su proučavali Kalayanasundaram i Das [65] pokazao je da je fention, organofosfat širokog spektra, povezan sa Cleodendron inerme, Pedalium murax i Parthenium hysterophorus. Uočena je značajna sinergija između ekstrakata sa sinergističkim efektom (SF) od 1,31, 1,38, 1,40, 1,48, 1,61 i 2,23, respektivno. U larvicidnom skriningu 15 vrsta mangrova, utvrđeno je da je ekstrakt petrolejskog etera korijena mangrove najefikasniji protiv Culex quinquefasciatus sa LC50 vrijednošću od 25,7 mg/L [66]. Sinergijski učinak ovog ekstrakta i botaničkog insekticida piretruma također je zabilježen u smanjenju LC50 piretruma protiv larvi C. quinquefasciatus sa 0,132 mg/L na 0,107 mg/L, a u ovoj studiji je korišten i SF izračun od 1,23. 34,35,44]. Kombinirana učinkovitost ekstrakta korijena Solanum citron i nekoliko sintetičkih insekticida (npr. fention, cipermetrin (sintetički piretroid) i timetfos (organofosforni larvicid)) protiv komaraca Anopheles procijenjena je. Stephensi [54] i C. quinquefasciatus [34]. Kombinirana upotreba cipermetrina i ekstrakta petrolejskog etera žutog ploda pokazala je sinergijski učinak na cipermetrin u svim omjerima. Najefikasniji omjer bio je binarna kombinacija 1:1 s vrijednostima LC50 i SF od 0,0054 ppm i 6,83, respektivno, u odnosu na An. Stephen West [54]. Dok je binarna mješavina S. xanthocarpum i temefosa u omjeru 1:1 bila antagonistička (SF = 0,6406), kombinacija S. xanthocarpum-fention (1:1) pokazala je sinergističku aktivnost protiv C. quinquefasciatus sa SF od 1,3125 [34]]. Tong i Blomquist [35] proučavali su efekte biljnog etilen oksida na toksičnost karbarila (karbamata širokog spektra) i permetrina na komarce Aedes. Aedes aegypti. Rezultati su pokazali da etilen oksid iz agara, crnog bibera, kleke, smilja, sandalovine i sezama povećava toksičnost karbarila na komarce Aedes. Vrijednosti SR za larve Aegypti variraju od 1,0 do 7,0. Nasuprot tome, nijedan od EO nije bio toksičan za odrasle komarce Aedes. U ovoj fazi nisu zabilježeni sinergijski efekti za kombinaciju Aedes aegypti i EO-karbarila. PBO je korišten kao pozitivna kontrola za pojačavanje toksičnosti karbarila protiv komaraca Aedes. Vrijednosti SR larvi i odraslih Aedes aegypti su 4,9-9,5 i 2,3, respektivno. Samo binarne smjese permetrina i EO ili PBO testirane su na larvicidno djelovanje. Smjesa EO-permetrin imala je antagonistički učinak, dok je smjesa PBO-permetrin imala sinergijski učinak protiv komaraca Aedes. Larve Aedes aegypti. Međutim, eksperimenti s odgovorom na dozu i evaluacija SR za smjese PBO-permetrin još nisu provedeni. Iako je postignuto malo rezultata u vezi s sinergijskim efektima fitosintetskih kombinacija protiv vektora komaraca, ovi podaci podržavaju postojeće rezultate, koji otvaraju mogućnost dodavanja sinergista ne samo radi smanjenja primijenjene doze, već i radi povećanja efekta ubijanja. Efikasnost insekata. Osim toga, rezultati ove studije su prvi put pokazali da ulja C. rotundus i A. galanga sinergijski pokazuju značajno veću efikasnost protiv sojeva komaraca Aedes osjetljivih i otpornih na piretroide u poređenju sa PBO kada se kombinuje sa toksičnošću permetrina. Aedes aegypti. Međutim, neočekivani rezultati sinergističke analize pokazali su da ulje C. verum ima najveću anti-odraslu aktivnost protiv oba soja Aedes. Iznenađujuće, toksični efekat permetrina na Aedes aegypti bio je nezadovoljavajući. Varijacije u toksičnim efektima i sinergijskim efektima mogu biti dijelom posljedica izloženosti različitim vrstama i nivoima bioaktivnih komponenti u ovim uljima.
Uprkos naporima da se shvati kako poboljšati efikasnost, sinergijski mehanizmi ostaju nejasni. Mogući razlozi za različitu efikasnost i sinergijski potencijal mogu uključivati razlike u hemijskom sastavu testiranih proizvoda i razlike u osjetljivosti komaraca povezane sa statusom i razvojem otpornosti. Postoje razlike između glavnih i sporednih komponenti etilen oksida testiranih u ovoj studiji, a za neke od ovih spojeva je pokazano da imaju repelentne i toksične efekte protiv raznih štetočina i vektora bolesti [61,62,64,67,68]. Međutim, glavni spojevi karakterizirani u uljima C. rotundus, A. galanga i C. verum, kao što su cipern, β-bisabolen i cinamaldehid, nisu testirani u ovom radu na njihovu anti-adultnu i sinergističku aktivnost protiv Ae, respektivno, Aedes aegypti. Stoga su potrebna buduća istraživanja kako bi se izolovali aktivni sastojci prisutni u svakom esencijalnom ulju i razjasnila njihova insekticidna efikasnost i sinergijske interakcije protiv ovog vektora komaraca. Općenito, insekticidna aktivnost ovisi o djelovanju i reakciji između otrova i tkiva insekata, što se može pojednostaviti i podijeliti u tri faze: prodiranje u kožu tijela insekta i membrane ciljnih organa, aktivacija (= interakcija s metom) i detoksikacija otrovnih tvari [57, 69]. Stoga, sinergizam insekticida koji rezultira povećanom učinkovitošću kombinacija otrova zahtijeva barem jednu od ovih kategorija, kao što su povećana penetracija, veća aktivacija akumuliranih spojeva ili manje smanjena detoksikacija aktivnog sastojka pesticida. Na primjer, energetska tolerancija odgađa prodiranje kutikule kroz zadebljanu kutikulu i biokemijska otpornost, kao što je poboljšani metabolizam insekticida uočen kod nekih otpornih sojeva insekata [70, 71]. Značajna učinkovitost etanola (EO) u povećanju toksičnosti permetrina, posebno protiv PMD-R, može ukazivati na rješenje problema otpornosti na insekticide interakcijom s mehanizmima otpornosti [57, 69, 70, 71]. Tong i Blomquist [35] podržali su rezultate ove studije demonstrirajući sinergističku interakciju između EO i sintetičkih pesticida. aegypti, postoje dokazi o inhibitornoj aktivnosti protiv detoksikacijskih enzima, uključujući citokrom P450 monooksigenaze i karboksilesteraze, koje su usko povezane s razvojem otpornosti na tradicionalne pesticide. PBO se ne smatra samo metaboličkim inhibitorom citokrom P450 monooksigenaze, već i poboljšava penetraciju insekticida, što je dokazano njegovom upotrebom kao pozitivne kontrole u sinergijskim studijama [35, 72]. Zanimljivo je da je 1,8-cineol, jedna od važnih komponenti koje se nalaze u ulju galangala, poznat po svojim toksičnim efektima na vrste insekata [22, 63, 73] i da je zabilježeno da ima sinergijske efekte u nekoliko područja istraživanja biološke aktivnosti [74]. ,75,76,77]. Osim toga, 1,8-cineol u kombinaciji s raznim lijekovima, uključujući kurkumin [78], 5-fluorouracil [79], mefenaminsku kiselinu [80] i zidovudin [81], također ima učinak koji potiče permeaciju in vitro. Dakle, moguća uloga 1,8-cineola u sinergističkom insekticidnom djelovanju nije samo kao aktivni sastojak, već i kao pojačivač penetracije. Zbog većeg sinergizma s permetrinom, posebno protiv PMD-R, sinergijski efekti ulja galangala i ulja trihozantesa uočeni u ovoj studiji mogu biti rezultat interakcija s mehanizmima otpornosti, tj. povećane propusnosti za hlor. Piretroidi povećavaju aktivaciju akumuliranih spojeva i inhibiraju detoksikacijske enzime kao što su citokrom P450 monooksigenaze i karboksilesteraze. Međutim, ovi aspekti zahtijevaju daljnja istraživanja kako bi se razjasnila specifična uloga EO i njegovih izoliranih spojeva (samostalno ili u kombinaciji) u sinergijskim mehanizmima.
Godine 1977. zabilježen je porast nivoa otpornosti na permetrin u glavnim populacijama vektora u Tajlandu, a tokom narednih decenija, upotreba permetrina je uglavnom zamijenjena drugim piretroidnim hemikalijama, posebno onima koje je zamijenio deltametrin [82]. Međutim, otpornost vektora na deltametrin i druge klase insekticida izuzetno je česta u cijeloj zemlji zbog prekomjerne i uporne upotrebe [14, 17, 83, 84, 85, 86]. Za borbu protiv ovog problema preporučuje se rotacija ili ponovna upotreba odbačenih pesticida koji su prethodno bili efikasni i manje toksični za sisare, poput permetrina. Trenutno, iako je upotreba permetrina smanjena u nedavnim nacionalnim vladinim programima suzbijanja komaraca, otpornost na permetrin se i dalje može naći u populacijama komaraca. To može biti posljedica izloženosti komaraca komercijalnim proizvodima za suzbijanje štetočina u domaćinstvima, koji se uglavnom sastoje od permetrina i drugih piretroida [14, 17]. Dakle, uspješna ponovna upotreba permetrina zahtijeva razvoj i implementaciju strategija za smanjenje otpornosti vektora. Iako nijedno od esencijalnih ulja testiranih pojedinačno u ovoj studiji nije bilo toliko efikasno kao permetrin, zajednički rad s permetrinom rezultirao je impresivnim sinergijskim efektima. Ovo je obećavajući pokazatelj da interakcija EO s mehanizmima otpornosti rezultira time da je kombinacija permetrina s EO efikasnija od insekticida ili EO samostalno, posebno protiv PMD-R Ae. Aedes aegypti. Prednosti sinergističkih mješavina u povećanju efikasnosti, uprkos upotrebi nižih doza za kontrolu vektora, mogu dovesti do poboljšanog upravljanja otpornošću i smanjenja troškova [33, 87]. Iz ovih rezultata, zadovoljstvo je primijetiti da su EO A. galanga i C. rotundus bili značajno efikasniji od PBO u sinergističkom djelovanju toksičnosti permetrina i kod sojeva MCM-S i PMD-R i predstavljaju potencijalnu alternativu tradicionalnim ergogenim pomagalima.
Odabrani EO imali su značajne sinergijske efekte u povećanju toksičnosti za odrasle osobe protiv PMD-R Ae. aegypti, posebno ulje galangala, koje ima SR vrijednost do 1233,33, što ukazuje na to da EO ima širok potencijal kao sinergist u poboljšanju efikasnosti permetrina. Ovo bi moglo stimulirati upotrebu novog aktivnog prirodnog proizvoda, što bi zajedno moglo povećati upotrebu visoko efikasnih proizvoda za suzbijanje komaraca. Također otkriva potencijal etilen oksida kao alternativnog sinergista za efikasno poboljšanje starijih ili tradicionalnih insekticida kako bi se riješili postojeći problemi otpornosti u populacijama komaraca. Korištenje lako dostupnih biljaka u programima suzbijanja komaraca ne samo da smanjuje ovisnost o uvoznim i skupim materijalima, već i stimulira lokalne napore za jačanje sistema javnog zdravstva.
Ovi rezultati jasno pokazuju značajan sinergijski efekat koji proizvodi kombinacija etilen oksida i permetrina. Rezultati ističu potencijal etilen oksida kao biljnog sinergista u kontroli komaraca, povećavajući efikasnost permetrina protiv komaraca, posebno u rezistentnim populacijama. Budući razvoj i istraživanja zahtijevat će sinergijsku bioanalizu ulja galangala i alpinije i njihovih izolovanih jedinjenja, kombinacije insekticida prirodnog ili sintetičkog porijekla protiv više vrsta i stadijuma komaraca, te testiranje toksičnosti protiv organizama koji nisu ciljna grupa. Praktična upotreba etilen oksida kao održivog alternativnog sinergista.
Svjetska zdravstvena organizacija. Globalna strategija za prevenciju i kontrolu denge 2012–2020. Ženeva: Svjetska zdravstvena organizacija, 2012.
Weaver SC, Costa F., Garcia-Blanco MA, Ko AI, Ribeiro GS, Saade G., et al. Zika virus: istorijat, pojava, biologija i izgledi za kontrolu. Antivirusna istraživanja. 2016;130:69–80.
Svjetska zdravstvena organizacija. Informativni list o dengi. 2016. http://www.searo.who.int/entity/vector_borne_tropical_diseases/data/data_factsheet/en/. Datum pristupa: 20. januar 2017.
Ministarstvo javnog zdravstva. Trenutno stanje slučajeva denga groznice i hemoragijske denga groznice u Tajlandu. 2016. http://www.m-society.go.th/article_attach/13996/17856.pdf. Datum pristupa: 6. januar 2017.
Ooi EE, Goh CT, Gabler DJ. 35 godina prevencije denge i kontrole vektora u Singapuru. Iznenadna zarazna bolest. 2006;12:887–93.
Morrison AC, Zielinski-Gutierrez E, Scott TW, Rosenberg R. Identifikacija izazova i predlaganje rješenja za kontrolu virusnih vektora Aedes aegypti. PLOS Medicine. 2008;5:362–6.
Centri za kontrolu i prevenciju bolesti. Denga groznica, entomologija i ekologija. 2016. http://www.cdc.gov/dengue/entomologyecology/. Datum pristupa: 6. januar 2017.
Ohimain EI, Angaye TKN, Bassey SE Poređenje larvicidne aktivnosti lišća, kore, stabljika i korijena Jatropa curcas (Euphorbiaceae) protiv vektora malarije Anopheles gambiae. SZhBR. 2014;3:29-32.
Soleimani-Ahmadi M, Watandoust H, Zareh M. Karakteristike staništa larvi Anophelesa u područjima zahvaćenim malarijom u okviru programa iskorjenjivanja malarije u jugoistočnom Iranu. Asia Pacific J Trop Biomed. 2014;4(Suppl 1):S73–80.
Bellini R, Zeller H, Van Bortel W. Pregled pristupa kontroli vektora, prevenciji i kontroli epidemija virusa Zapadnog Nila i izazovi s kojima se suočava Evropa. Vektor parazita. 2014;7:323.
Muthusamy R., Shivakumar MS Selekcija i molekularni mehanizmi otpornosti na cipermetrin kod crvenih gusjenica (Amsacta albistriga Walker). Biohemijska fiziologija štetočina. 2014;117:54–61.
Ramkumar G., Shivakumar MS Laboratorijska studija otpornosti na permetrin i unakrsne otpornosti Culex quinquefasciatus na druge insekticide. Istraživački centar Palastor. 2015;114:2553–60.
Matsunaka S, Hutson DH, Murphy SD. Hemija pesticida: Ljudska dobrobit i okoliš, svezak 3: Mehanizam djelovanja, metabolizam i toksikologija. New York: Pergamon Press, 1983.
Chareonviriyaphap T, Bangs MJ, Souvonkert V, Kongmi M, Korbel AV, Ngoen-Klan R. Pregled otpornosti na insekticide i izbjegavanja ponašanja vektora ljudskih bolesti u Tajlandu. Vektor parazita. 2013;6:280.
Chareonviriyaphap T, Aum-Aung B, Ratanatham S. Trenutni obrasci otpornosti na insekticide među vektorima komaraca u Tajlandu. Jugoistočna Azija J Trop Med Javno zdravlje. 1999;30:184-94.
Chareonviriyaphap T, Bangs MJ, Ratanatham S. Status malarije u Tajlandu. Jugoistočna Azija J Trop Med Javno zdravlje. 2000;31:225–37.
Plernsub S, Saingamsuk J, Yanola J, Lumjuan N, Thippavankosol P, Walton S, Somboon P. Vremenska učestalost mutacija otpornosti na udar F1534C i V1016G kod komaraca Aedes aegypti u Chiang Maiju, Tajland, i utjecaj mutacija na efikasnost termalnih sprejeva za maglu koji sadrže piretroide. Aktatrop. 2016;162:125–32.
Vontas J, Kioulos E, Pavlidi N, Moru E, Della Torre A, Ranson H. Otpornost na insekticide u glavnim vektorima denga groznice Aedes albopictus i Aedes aegypti. Biohemijska fiziologija štetočina. 2012;104:126–31.
Vrijeme objave: 08.07.2024.