DELLA proteini su konzervirani glavniregulatori rasta...koji igraju centralnu ulogu u kontroli razvoja biljaka kao odgovor na unutrašnje i okolišne signale.PE djeluje kao transkripcijski regulator i regrutuje se za ciljne promotore vezivanjem za transkripcijske faktore (TF) i histon H2A putem svog GRAS domene. Nedavne studije su pokazale da je stabilnost PE posttranslaciono regulisana putem dva mehanizma: poliubikvitinacije indukovane fitohormonom giberelinom, što dovodi do njegove brze degradacije, i konjugacije malih modifikatora sličnih ubikvitinu (SUMO) kako bi se povećala njegova akumulacija. Pored toga, aktivnost PE dinamički je regulisana putem dvije različite glikozilacije: interakcija PE-TF je pojačana O-fukozilacijom, ali inhibirana O-vezanom modifikacijom N-acetilglukozamina (O-GlcNAc). Međutim, uloga PE fosforilacije ostaje nejasna, jer su prethodne studije pokazale oprečne rezultate, od onih koji pokazuju da fosforilacija promoviše ili smanjuje PE degradaciju do drugih koji pokazuju da fosforilacija ne utiče na njenu stabilnost. Ovdje identifikujemo mjesta fosforilacije u REPRESOR-u.ga1-3(RGA, AtDELLA) pročišćeni iz Arabidopsis thaliana analizom masene spektrometrije i pokazuju da fosforilacija dva RGA peptida na PolyS i PolyS/T regijama potiče vezivanje H2A i pojačava RGA aktivnost. Povezanost RGA s ciljnim promotorima. Značajno je da fosforilacija ne utječe na RGA-TF interakcije ili RGA stabilnost. Naša studija otkriva molekularni mehanizam kojim fosforilacija inducira DJAL aktivnost.
Da bi se razjasnila uloga fosforilacije u regulaciji funkcije CYP2D6, ključno je identificirati mjesta fosforilacije CYP2D6 in vivo i provesti funkcionalne analize u biljkama. Afinitetnim pročišćavanjem biljnih ekstrakata, a zatim MS/MS analizom, identificirali smo nekoliko fosfozita u RGA. U uvjetima nedostatka GA, fosforilacija RHA se povećava, ali fosforilacija ne utječe na njenu stabilnost. Važno je napomenuti da su co-IP i ChIP-qPCR testovi otkrili da fosforilacija u PolyS/T regiji RGA promovira njegovu interakciju s H2A i njegovo povezivanje s ciljnim promotorima, otkrivajući mehanizam kojim fosforilacija inducira funkciju RGA.
RGA se regrutuje za ciljni hromatin putem interakcije LHR1 poddomene sa TF, a zatim se veže za H2A putem svoje PolyS/T regije i PFYRE poddomene, formirajući H2A-RGA-TF kompleks kako bi stabilizovao RGA. Fosforilacija Pep 2 u PolyS/T regiji između Domain-a i GRAS domene pomoću neidentificirane kinaze pojačava vezivanje RGA-H2A. Mutantni protein rgam2A ukida fosforilaciju RGA i usvaja drugačiju proteinsku konformaciju kako bi ometao vezivanje H2A. To rezultira destabilizacijom prolaznih TF-rgam2A interakcija i disocijacijom rgam2A od ciljnog hromatina. Ova slika prikazuje samo RGA-posredovanu transkripcijsku represiju. Sličan obrazac mogao bi se opisati za RGA-posredovanu transkripcijsku aktivaciju, osim što bi H2A-RGA-TF kompleks promovirao transkripciju ciljnog gena, a defosforilacija rgam2A bi smanjila transkripciju. Slika je modificirana od Huang et al.21.
Svi kvantitativni podaci su statistički analizirani korištenjem Excela, a značajne razlike su utvrđene korištenjem Studentovog t-testa. Nisu korištene statističke metode za preliminarno određivanje veličine uzorka. Nijedan podatak nije isključen iz analize; eksperiment nije bio randomiziran; istraživači nisu bili slijepi u pogledu distribucije podataka tokom eksperimenta i evaluacije rezultata. Veličina uzorka je naznačena u legendi slike i izvornoj datoteci s podacima.
Za više informacija o dizajnu studije, pogledajte sažetak izvještaja o prirodnom portfoliju povezan s ovim člankom.
Podaci proteomike masene spektrometrije dostavljeni su konzorciju ProteomeXchange putem partnerskog repozitorija PRIDE66 s identifikatorom skupa podataka PXD046004. Svi ostali podaci dobiveni tokom ove studije predstavljeni su u Dodatnim informacijama, Dodatnim datotekama s podacima i Datotekama sirovih podataka. Izvorni podaci navedeni su za ovaj članak.
Vrijeme objave: 08.11.2024.