Široka upotreba sintetičkih pesticida dovela je do mnogih problema, uključujući pojavu otpornih organizama, degradaciju okoliša i štetu po ljudsko zdravlje.Stoga su hitno potrebni novi mikrobni pesticidi koji su sigurni za zdravlje ljudi i okoliš.U ovoj studiji, ramnolipidni biosurfaktant proizveden od Enterobacter cloacae SJ2 korišten je za procjenu toksičnosti za larve komaraca (Culex quinquefasciatus) i termita (Odontotermes obesus).Rezultati su pokazali da između tretmana postoji stopa smrtnosti zavisna od doze.Vrijednost LC50 (50% smrtonosne koncentracije) nakon 48 sati za biosurfaktante termita i larvi komaraca određena je korištenjem metode prilagođavanja krivulje nelinearne regresije.Rezultati su pokazali da su 48-časovne LC50 vrijednosti (95% interval pouzdanosti) larvicidne i antitermitne aktivnosti biosurfaktanta bile 26,49 mg/L (raspon 25,40 do 27,57) i 33,43 mg/L (raspon 31,09 do 35,68), respektivno, 33,43 mg/L (raspon 31,09 do 35,68), respektivno.Prema histopatološkom pregledu, tretman biosurfaktantima je uzrokovao teška oštećenja tkiva organela larvi i termita.Rezultati ove studije pokazuju da je mikrobni biosurfaktant koji proizvodi Enterobacter cloacae SJ2 odličan i potencijalno efikasan alat za kontrolu Cx.quinquefasciatus i O. obesus.
Tropske zemlje doživljavaju veliki broj bolesti koje prenose komarci1.Relevantnost bolesti koje prenose komarci je široko rasprostranjena.Više od 400.000 ljudi umre od malarije svake godine, a neki veliki gradovi doživljavaju epidemije ozbiljnih bolesti kao što su denga, žuta groznica, čikungunya i zika.2 Vektorske bolesti povezane su sa jednom od šest infekcija širom svijeta, a najviše izazivaju komarci. značajni slučajevi3 ,4.Culex, Anopheles i Aedes su tri roda komaraca koji se najčešće povezuju s prijenosom bolesti5.Prevalencija denga groznice, infekcije koju prenosi komarac Aedes aegypti, porasla je u protekloj deceniji i predstavlja značajnu prijetnju javnom zdravlju4,7,8.Prema Svjetskoj zdravstvenoj organizaciji (WHO), više od 40% svjetske populacije je u opasnosti od denga groznice, sa 50-100 miliona novih slučajeva godišnje u više od 100 zemalja9,10,11.Denga groznica je postala veliki javnozdravstveni problem jer se njena incidencija povećala širom svijeta12,13,14.Anopheles gambiae, poznatiji kao afrički komarac Anopheles, najvažniji je vektor ljudske malarije u tropskim i suptropskim regijama15.Virus Zapadnog Nila, encefalitis St. Louisa, japanski encefalitis i virusne infekcije konja i ptica prenose Culex komarci, koji se često nazivaju kućnim komarcima.Osim toga, oni su i prenosioci bakterijskih i parazitskih bolesti16.U svijetu postoji više od 3.000 vrsta termita, koji postoje već više od 150 miliona godina17.Većina štetočina živi u tlu i hrani se drvetom i proizvodima od drveta koji sadrže celulozu.Indijski termit Odontotermes obesus je važan štetočina koji uzrokuje ozbiljna oštećenja važnih usjeva i plantažnih stabala18.U poljoprivrednim područjima najezde termita u različitim fazama mogu uzrokovati ogromnu ekonomsku štetu raznim usjevima, vrstama drveća i građevinskom materijalu.Termiti također mogu uzrokovati probleme sa zdravljem ljudi19.
Pitanje otpornosti mikroorganizama i štetočina u današnjim farmaceutskim i poljoprivrednim oblastima je složeno20,21.Stoga bi obje kompanije trebale tražiti nove isplative antimikrobne lijekove i sigurne biopesticide.Sintetički pesticidi su sada dostupni i pokazalo se da su zarazni i odbijaju neciljane korisne insekte22.Posljednjih godina istraživanja o biosurfaktantima su se proširila zbog njihove primjene u različitim industrijama.Biosurfaktanti su vrlo korisni i vitalni u poljoprivredi, sanaciji tla, ekstrakciji nafte, uklanjanju bakterija i insekata i preradi hrane23,24.Biosurfaktanti ili mikrobiološki surfaktanti su hemikalije biosurfaktanta koje proizvode mikroorganizmi kao što su bakterije, kvasci i gljive u obalnim staništima i naftom kontaminiranim područjima25,26.Hemijski dobiveni surfaktanti i biosurfaktanti su dvije vrste koje se dobivaju direktno iz prirodnog okruženja27.Različiti biosurfaktanti se dobijaju iz morskih staništa28,29.Stoga naučnici traže nove tehnologije za proizvodnju biosurfaktanata na bazi prirodnih bakterija30,31.Napredak u takvim istraživanjima pokazuje važnost ovih bioloških jedinjenja za zaštitu životne sredine32.Bacillus, Pseudomonas, Rhodococcus, Alcaligenes, Corynebacterium i ovi rodovi bakterija su dobro proučeni predstavnici23,33.
Postoje mnoge vrste biosurfaktanata sa širokim spektrom primjena34.Značajna prednost ovih jedinjenja je ta što neki od njih imaju antibakterijsko, larvicidno i insekticidno dejstvo.To znači da se mogu koristiti u poljoprivrednoj, hemijskoj, farmaceutskoj i kozmetičkoj industriji35,36,37,38.Budući da su biosurfaktanti općenito biorazgradivi i ekološki korisni, koriste se u integriranim programima upravljanja štetočinama za zaštitu usjeva39.Tako su stečena osnovna znanja o larvicidnom i antitermitskom djelovanju mikrobnih biosurfaktanata koje proizvodi Enterobacter cloacae SJ2.Ispitivali smo mortalitet i histološke promjene pri izlaganju različitim koncentracijama ramnolipidnih biosurfaktanata.Osim toga, procijenili smo široko korišteni kompjuterski program Kvantitativna struktura-aktivnost (QSAR) Ecological Structure-Activity (ECOSAR) za određivanje akutne toksičnosti za mikroalge, dafnije i ribe.
U ovoj studiji ispitana je antitermitna aktivnost (toksičnost) pročišćenih biosurfaktanata u različitim koncentracijama u rasponu od 30 do 50 mg/ml (u intervalima od 5 mg/ml) protiv indijskih termita, O. obesus i četvrte vrste )Procijeniti.Larve instara Cx.Larve komaraca quinquefasciatus.Koncentracije biosurfaktanta LC50 tokom 48 sati protiv O. obesus i Cx.C. solanacearum.Larve komaraca identifikovane su metodom prilagođavanja krivulje nelinearne regresije.Rezultati su pokazali da se smrtnost termita povećava sa povećanjem koncentracije biosurfaktanta.Rezultati su pokazali da biosurfaktant ima larvicidnu aktivnost (slika 1) i antitermitsku aktivnost (slika 2), sa 48-satnim LC50 vrijednostima (95% CI) od 26,49 mg/L (25,40 do 27,57 ) i 33,43 mg/ l (sl. 31.09 do 35.68), respektivno (tabela 1).U smislu akutne toksičnosti (48 sati), biosurfaktant je klasifikovan kao "štetan" za testirane organizme.Biosurfaktant proizveden u ovoj studiji pokazao je odličnu larvicidnu aktivnost sa 100% smrtnošću unutar 24-48 sati od izlaganja.
Izračunajte LC50 vrijednost za larvicidnu aktivnost.Prilagođavanje krivulje nelinearne regresije (puna linija) i 95% interval pouzdanosti (osjenčano područje) za relativnu smrtnost (%).
Izračunajte LC50 vrijednost za antitermitsku aktivnost.Prilagođavanje krivulje nelinearne regresije (puna linija) i 95% interval pouzdanosti (osjenčano područje) za relativnu smrtnost (%).
Na kraju eksperimenta pod mikroskopom su uočene morfološke promjene i anomalije.Morfološke promjene su uočene u kontrolnoj i tretiranoj grupi pri 40x uvećanju.Kao što je prikazano na slici 3, došlo je do poremećaja rasta kod većine ličinki tretiranih biosurfaktantima.Slika 3a prikazuje normalan Cx.quinquefasciatus, Slika 3b prikazuje anomalan Cx.Uzrokuje pet larvi nematoda.
Utjecaj subletalnih (LC50) doza biosurfaktanata na razvoj larvi Culex quinquefasciatus.Slika svjetlosnog mikroskopa (a) normalnog Cx pri 40x uvećanju.quinquefasciatus (b) Abnormalni Cx.Uzrokuje pet larvi nematoda.
U ovoj studiji, histološki pregled tretiranih larvi (slika 4) i termita (slika 5) otkrio je nekoliko abnormalnosti, uključujući smanjenje abdominalnog područja i oštećenje mišića, epitelnih slojeva i kože.midgut.Histologija je otkrila mehanizam inhibitorne aktivnosti biosurfaktanta korištenog u ovoj studiji.
Histopatologija normalnih neliječenih larvi Cx 4. stupnja.larve quinquefasciatus (kontrola: (a,b)) i tretirane biosurfaktantom (tretman: (c,d)).Strelice pokazuju tretirani crijevni epitel (epi), jezgre (n) i mišiće (mu).Bar = 50 µm.
Histopatologija normalnog neliječenog O. obesus (kontrola: (a,b)) i tretiranog biosurfaktantom (liječenje: (c,d)).Strelice pokazuju crijevni epitel (epi) i mišić (mu), respektivno.Bar = 50 µm.
U ovoj studiji, ECOSAR je korišten za predviđanje akutne toksičnosti proizvoda ramnolipidnog biosurfaktanta na primarne proizvođače (zelene alge), primarne potrošače (vodene buhe) i sekundarne potrošače (ribe).Ovaj program koristi sofisticirane kvantitativne modele jedinjenja strukture i aktivnosti za procjenu toksičnosti na osnovu molekularne strukture.Model koristi softver strukturne aktivnosti (SAR) za izračunavanje akutne i dugotrajne toksičnosti supstanci za vodene vrste.Konkretno, tabela 2 sumira procijenjene srednje smrtonosne koncentracije (LC50) i srednje efektivne koncentracije (EC50) za nekoliko vrsta.Sumnja na toksičnost je kategorizirana u četiri nivoa korištenjem Globalno harmonizovanog sistema klasifikacije i označavanja hemikalija (Tabela 3).
Suzbijanje vektorskih bolesti, posebno sojeva komaraca i Aedes komaraca.Egipćani, sada težak posao 40,41,42,43,44,45,46.Iako su neki hemijski dostupni pesticidi, kao što su piretroidi i organofosfati, donekle korisni, oni predstavljaju značajan rizik za ljudsko zdravlje, uključujući dijabetes, reproduktivne poremećaje, neurološke poremećaje, rak i respiratorne bolesti.Štaviše, s vremenom ovi insekti mogu postati otporni na njih13,43,48.Tako će efikasne i ekološki prihvatljive biološke mjere suzbijanja postati popularnija metoda suzbijanja komaraca49,50.Benelli51 je sugerirao da bi rana kontrola vektora komaraca bila efikasnija u urbanim područjima, ali nisu preporučili upotrebu larvicida u ruralnim područjima52.Tom i ostali 53 također su sugerirali da bi suzbijanje komaraca u njihovim nezrelim fazama bila sigurna i jednostavna strategija jer su osjetljiviji na agense za suzbijanje 54 .
Proizvodnja biosurfaktanta od strane snažnog soja (Enterobacter cloacae SJ2) pokazala je dosljednu i obećavajuću efikasnost.Naša prethodna studija je izvijestila da Enterobacter cloacae SJ2 optimizira proizvodnju biosurfaktanta koristeći fizičko-hemijske parametre26.Prema njihovoj studiji, optimalni uslovi za proizvodnju biosurfaktanta potencijalnim izolatom E. cloacae bili su inkubacija od 36 sati, miješanje na 150 o/min, pH 7,5, 37 °C, salinitet 1 ppt, 2% glukoze kao izvor ugljika, 1% kvasca .ekstrakt je korišten kao izvor dušika za dobivanje 2,61 g/L biosurfaktanta.Osim toga, biosurfaktanti su karakterizirani korištenjem TLC, FTIR i MALDI-TOF-MS.Ovo je potvrdilo da je ramnolipid biosurfaktant.Glikolipidni biosurfaktanti su najintenzivnije proučavana klasa drugih vrsta biosurfaktanata55.Sastoje se od ugljikohidratnih i lipidnih dijelova, uglavnom lanaca masnih kiselina.Među glikolipidima, glavni predstavnici su ramnolipid i soforolipid56.Ramnolipidi sadrže dva dela ramnoze povezana sa mono- ili di-β-hidroksidekanskom kiselinom 57 .Upotreba ramnolipida u medicinskoj i farmaceutskoj industriji je dobro poznata 58 , uz njihovu nedavnu upotrebu kao pesticida 59 .
Interakcija biosurfaktanta sa hidrofobnom regijom respiratornog sifona omogućava vodi da prođe kroz njegovu stomatnu šupljinu, čime se povećava kontakt larvi sa vodenim okruženjem.Prisustvo biosurfaktanata utiče i na dušnik čija je dužina blizu površine, što larvama olakšava puzanje do površine i disanje.Kao rezultat, površinski napon vode se smanjuje.Budući da se ličinke ne mogu pričvrstiti za površinu vode, padaju na dno rezervoara, remete hidrostatički pritisak, što rezultira prekomjernim trošenjem energije i smrću utapanjem38,60.Slične rezultate je dobio Ghribi61, gdje je biosurfaktant proizveden od Bacillus subtilis pokazao larvicidnu aktivnost protiv Ephestia kuehniella.Slično, larvicidna aktivnost Cx.Das i Mukherjee23 su također procijenili učinak cikličkih lipopeptida na larve quinquefasciatus.
Rezultati ove studije odnose se na larvicidnu aktivnost ramnolipidnih biosurfaktanata protiv Cx.Ubijanje komaraca quinquefasciatus u skladu je s prethodno objavljenim rezultatima.Na primjer, koriste se biosurfaktanti na bazi surfaktana koje proizvode različite bakterije roda Bacillus.i Pseudomonas spp.Neki rani izvještaji64,65,66 su prijavili aktivnost lipopeptidnih biosurfaktanata iz Bacillus subtilis23 ubijanja larvi.Deepali et al.63 otkrili su da ramnolipidni biosurfaktant izolovan iz Stenotropomonas maltophilia ima snažno larvicidno djelovanje u koncentraciji od 10 mg/L.Silva et al.67 prijavio je larvicidnu aktivnost ramnolipidnog biosurfaktanta protiv Ae u koncentraciji od 1 g/L.Aedes aegypti.Kanakdande et al.68 navodi da lipopeptidni biosurfaktanti proizvedeni od strane Bacillus subtilis uzrokuju ukupnu smrtnost Culex larvi i termita s lipofilnom frakcijom eukaliptusa.Slično, Masendra et al.69 prijavilo je smrtnost mrava radnika (Cryptotermes cynocephalus Light.) od 61,7% u lipofilnim frakcijama n-heksana i EtOAc sirovog ekstrakta E..
Parthipan i ostali 70 su izvijestili o insekticidnoj upotrebi lipopeptidnih biosurfaktanata koje proizvode Bacillus subtilis A1 i Pseudomonas stutzeri NA3 protiv Anopheles Stephensi, vektora malarijskog parazita Plasmodium.Uočili su da su ličinke i kukuljice duže preživljavale, imale kraće periode ovipozicije, bile su sterilne i imale kraći životni vijek kada su tretirane različitim koncentracijama biosurfaktanata.Uočene vrijednosti LC50 biosurfaktanta A1 B. subtilis bile su 3,58, 4,92, 5,37, 7,10 i 7,99 mg/L za različita stanja larve (tj. larve I, II, III, IV i lutke u stadiju).Poređenja radi, biosurfaktanti za stadijume larve I-IV i kukuljice Pseudomonas stutzeri NA3 bili su 2,61, 3,68, 4,48, 5,55 i 6,99 mg/L, respektivno.Smatra se da je odgođena fenologija preživjelih ličinki i kukuljica rezultat značajnih fizioloških i metaboličkih poremećaja uzrokovanih tretmanima insekticidima71.
Wickerhamomyces anomalus soj CCMA 0358 proizvodi biosurfaktant sa 100% larvicidnom aktivnošću protiv Aedes komaraca.aegypti 24-satni interval 38 bio je veći nego što su objavili Silva et al.Pokazalo se da biosurfaktant proizveden od Pseudomonas aeruginosa koristeći suncokretovo ulje kao izvor ugljika ubija 100% larvi u roku od 48 sati 67 .Abinaya et al.72 i Pradhan et al.73 su također demonstrirali larvicidne ili insekticidne efekte surfaktanata koje proizvodi nekoliko izolata iz roda Bacillus.Prethodno objavljena studija Senthil-Nathana et al.otkrili su da će 100% larvi komaraca izloženih biljnim lagunama vjerovatno umrijeti.74.
Procjena subletalnih učinaka insekticida na biologiju insekata je kritična za programe integriranog upravljanja štetočinama jer subletalne doze/koncentracije ne ubijaju insekte, ali mogu smanjiti populaciju insekata u budućim generacijama narušavanjem bioloških karakteristika10.Siqueira i ostali 75 su uočili potpunu larvicidnu aktivnost (100% mortalitet) ramnolipidnog biosurfaktanta (300 mg/ml) kada su testirani u različitim koncentracijama u rasponu od 50 do 300 mg/ml.Stadij larve sojeva Aedes aegypti.Oni su analizirali efekte vremena do smrti i subletalnih koncentracija na preživljavanje larvi i aktivnost plivanja.Osim toga, primijetili su smanjenje brzine plivanja nakon 24-48 sati izlaganja subletalnim koncentracijama biosurfaktanta (npr. 50 mg/mL i 100 mg/mL).Smatra se da su otrovi koji imaju obećavajuću subletalnu ulogu efikasniji u nanošenju višestruke štete izloženim štetočinama76.
Histološka zapažanja naših rezultata pokazuju da biosurfaktanti proizvedeni od Enterobacter cloacae SJ2 značajno mijenjaju tkiva larvi komaraca (Cx. quinquefasciatus) i termita (O. obesus).Slične anomalije izazvali su preparati ulja bosiljka u An.gambiaes.s i An.arabicu je opisao Ochola77.Kamaraj i sar.78 su također opisali iste morfološke abnormalnosti kod An.Stephanieine larve bile su izložene nanočesticama zlata.Vasantha-Srinivasan i dr.79 su također izvijestili da je eterično ulje pastirske torbice ozbiljno oštetilo komoru i epitelne slojeve Aedes albopictus.Aedes aegypti.Raghavendran i saradnici su izvijestili da su larve komaraca tretirane sa 500 mg/ml micelijskog ekstrakta lokalne penicillium gljive.Ae pokazuju teška histološka oštećenja.aegypti i Cx.Stopa mortaliteta 80. Ranije, Abinaya et al.Proučavane su larve četvrtog stadija An.Stephensi i Ae.aegypti je pronašao brojne histološke promjene u Aedes aegypti tretiranom egzopolisaharidima B. licheniformis, uključujući želučano cekum, atrofiju mišića, oštećenje i dezorganizaciju ganglija nervnih moždina72.Prema Raghavendranu i sur., nakon tretmana ekstraktom micelija P. daleae, stanice srednjeg crijeva testiranih komaraca (larve 4. stadijuma) pokazale su oticanje lumena crijeva, smanjenje međućelijskog sadržaja i nuklearnu degeneraciju81.Iste histološke promjene uočene su kod larvi komaraca tretiranih ekstraktom lista ehinacee, što ukazuje na insekticidni potencijal tretiranih spojeva50.
Upotreba ECOSAR softvera dobila je međunarodno priznanje82.Trenutna istraživanja sugeriraju da akutna toksičnost ECOSAR biosurfaktanata na mikroalge (C. vulgaris), ribe i vodene buhe (D. magna) spada u kategoriju “toksičnosti” koju su definirale Ujedinjene nacije83.ECOSAR model ekotoksičnosti koristi SAR i QSAR za predviđanje akutne i dugoročne toksičnosti supstanci i često se koristi za predviđanje toksičnosti organskih zagađivača82,84.
Paraformaldehid, natrijum fosfatni pufer (pH 7,4) i sve druge hemikalije korištene u ovoj studiji kupljeni su od HiMedia Laboratories, Indija.
Proizvodnja biosurfaktanta izvedena je u Erlenmajerovim bocama od 500 mL koje su sadržavale 200 mL sterilnog Bushnell Haas medijuma sa dodatkom 1% sirovog ulja kao jedinog izvora ugljika.Prekultura Enterobacter cloacae SJ2 (1,4 × 104 CFU/ml) je inokulisana i kultivisana na orbitalnom šejkeru na 37°C, 200 rpm tokom 7 dana.Nakon perioda inkubacije, biosurfaktant je ekstrahovan centrifugiranjem medijuma kulture na 3400×g tokom 20 minuta na 4°C i dobijeni supernatant je upotrebljen za potrebe skrininga.Postupci optimizacije i karakterizacija biosurfaktanata usvojeni su iz naše ranije studije26.
Larve Culex quinquefasciatus dobijene su iz Centra za napredne studije u biologiji mora (CAS), Palanchipetai, Tamil Nadu (Indija).Larve su uzgajane u plastičnim posudama napunjenim dejoniziranom vodom na 27 ± 2°C i fotoperiodu od 12:12 (svjetlo:mrak).Larve komaraca hranjene su 10% rastvorom glukoze.
U otvorenim i nezaštićenim septičkim jamama pronađene su larve Culex quinquefasciatus.Koristite standardne smjernice za klasifikaciju za identifikaciju i kultivaciju larvi u laboratoriji85.Larvicidna ispitivanja sprovedena su u skladu sa preporukama Svetske zdravstvene organizacije 86 .SH.Larve četvrtog stadija quinquefasciatus sakupljene su u zatvorene epruvete u grupama od 25 ml i 50 ml sa zračnim rasporom od dvije trećine njihovog kapaciteta.Biosurfaktant (0-50 mg/ml) je dodan u svaku epruvetu pojedinačno i čuvan na 25 °C.Kontrolna epruveta koristila je samo destilovanu vodu (50 ml).Mrtvim larvama su smatrane one koje nisu pokazivale znake plivanja tokom perioda inkubacije (12-48 sati) 87 .Izračunajte postotak smrtnosti larvi koristeći jednadžbu.(1)88.
Porodica Odontotermitidae uključuje indijskog termita Odontotermes obesus, pronađenog u trulim trupcima u Poljoprivrednom kampusu (Univerzitet Annamalai, Indija).Testirajte ovaj biosurfaktant (0-50 mg/ml) koristeći uobičajene procedure kako biste utvrdili da li je štetan.Nakon sušenja u laminarnom strujanju zraka u trajanju od 30 minuta, svaka traka Whatman papira je premazana biosurfaktantom u koncentraciji od 30, 40 ili 50 mg/ml.Prethodno premazane i nepremazane papirne trake su testirane i upoređene u sredini Petrijeve posude.Svaka petrijeva posuda sadrži tridesetak aktivnih termita O. obesus.Kontrolnim i testnim termitima dat je mokar papir kao izvor hrane.Sve ploče su držane na sobnoj temperaturi tokom perioda inkubacije.Termiti su umirali nakon 12, 24, 36 i 48 sati89,90.Jednačina 1 je zatim korištena za procjenu postotka smrtnosti termita pri različitim koncentracijama biosurfaktanta.(2).
Uzorci su držani na ledu i pakirani u mikroepruvete koje sadrže 100 ml 0,1 M natrijum fosfatnog pufera (pH 7,4) i poslani u Centralnu laboratoriju za patologiju akvakulture (CAPL) Centra za akvakulturu Rajiv Gandhi (RGCA).Histološka laboratorija, Sirkali, Mayiladuthurai.Distrikt, Tamil Nadu, Indija za dalju analizu.Uzorci su odmah fiksirani u 4% paraformaldehidu na 37°C tokom 48 sati.
Nakon faze fiksacije, materijal je tri puta ispran sa 0,1 M natrijum fosfatnim puferom (pH 7,4), postupno dehidriran u etanolu i natopljen LEICA smolom 7 dana.Supstanca se zatim stavlja u plastični kalup napunjen smolom i polimerizatorom, a zatim se stavlja u pećnicu zagrijanu na 37°C dok blok koji sadrži supstancu potpuno ne polimerizira.
Nakon polimerizacije, blokovi su isečeni pomoću LEICA RM2235 mikrotoma (Rankin Biomedical Corporation 10,399 Enterprise Dr. Davisburg, MI 48,350, USA) na debljinu od 3 mm.Sekcije su grupisane na slajdovima, sa šest sekcija po slajdu.Stakalca su osušena na sobnoj temperaturi, zatim obojena hematoksilinom 7 min i isprana tekućom vodom 4 min.Osim toga, nanesite otopinu eozina na kožu 5 minuta i isperite tekućom vodom 5 minuta.
Akutna toksičnost je predviđena korištenjem vodenih organizama iz različitih tropskih nivoa: 96-satne ribe LC50, 48-satne D. magna LC50 i 96-satne zelene alge EC50.Toksičnost ramnolipidnih biosurfaktanata za ribe i zelene alge procijenjena je korištenjem ECOSAR softvera verzije 2.2 za Windows koji je razvila Američka agencija za zaštitu okoliša.(Dostupno na mreži na https://www.epa.gov/tsca-screening-tools/ecological-struct-activity-relationships-ecosar-predictive-model).
Svi testovi na larvicidnu i antitermitnu aktivnost obavljeni su u tri primjerka.Izvršena je nelinearna regresija (log varijabli odgovora na dozu) podataka o smrtnosti larvi i termita da bi se izračunala srednja smrtonosna koncentracija (LC50) s intervalom pouzdanosti od 95%, a krive koncentracijskog odgovora generirane su korištenjem Prism® (verzija 8.0, GraphPad Software) Inc., SAD) 84, 91.
Ova studija otkriva potencijal mikrobnih biosurfaktanata koje proizvodi Enterobacter cloacae SJ2 kao larvicidne i antitermitne agense protiv komaraca, a ovaj rad će doprinijeti boljem razumijevanju mehanizama larvicidnog i antitermitnog djelovanja.Histološka ispitivanja larvi tretiranih biosurfaktantima pokazala su oštećenje probavnog trakta, srednjeg crijeva, cerebralnog korteksa i hiperplaziju epitelnih stanica crijeva.Rezultati: Toksikološkom procjenom antitermitske i larvicidne aktivnosti ramnolipidnog biosurfaktanta koji proizvodi Enterobacter cloacae SJ2 otkriveno je da je ovaj izolat potencijalni biopesticid za suzbijanje vektorskih bolesti komaraca (Cx quinquefasciatus) i termita (O. obesus).Postoji potreba da se razumije osnovna ekološka toksičnost biosurfaktanata i njihov potencijalni utjecaj na okoliš.Ova studija pruža naučnu osnovu za procjenu ekološkog rizika od biosurfaktanata.
Vrijeme objave: Apr-09-2024